HPLC - 紫外检测

• 一浓度固定的供试液，采用 HPLC 紫外检测，当进样量加倍时，峰高、峰面积如何变化？
• 在线性范围以内：进样量加倍，因为紫外检测器属于摩尔型检测器，理论上峰面积会加倍，如果把峰当作三角形来计算的话，底边（峰宽不变）不变的时候，峰高确实会高一倍；但是实际上面积是大一倍，实际峰高只会高一些，不到一倍，因为峰型的影响因素很多，峰宽也会改变。线性范围以外没有实际讨论意义。

HPLC - MS

• 当采用HPLC-MS检测时，进样量加倍，峰高、峰面积如何变化？当进样量不变，分流比改变时，峰高、峰面积如何变化？
• MS检测器是检测离子数的，也是摩尔型检测器，理论上跟上面的是一样的。实际上MS检测器所受的影响因素更多，比如离子化效率、真空度等等，实际所得到的峰高增加值也不到一倍，峰面积增加值应该增加一倍左右，但通常峰面积增加值不到一倍。
• 当分流比改变，比如1/10改成1/100，那就应该是峰面积缩小十倍了，但是实际峰面积缩小不到10倍，可能9倍。峰高会缩小的倍数更少。

Notes

• 动物清洁等级
• 阳性对照
• 空白对照

推电子基团

• 强:
  -NH2 -NHR -NR2 -OH -O-
• 中:
  -NHCOCH3 -NHCOR -OCH3 -OR
• 弱: -CH3 -C2H5 -R -C6H5

吸电子基团:

• 强: -NO2 -NR3+ -CF3, -CCl3
• 中: -CN -SO3H -CO2H, -CO2R -CHO, -COR
• 弱: -F -Cl -Br -I

给电子基一般都是临位和对位导向，吸电子基一般都是间位导向，除了卤素。